【农用微生物菌剂国家标准】
表1 农用微生物菌剂产品的技术指标
表2 有机物料腐熟剂产品的技术指标
5.3.2农用微生物菌剂产品中无害化指标见表3。
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6 试验方法
6.1 仪器设备(略)
6.2 试剂(略)
6.3 产品参数的检测
6.3.1 外观(感官)的测定
取少量样品放到白色搪瓷盘(或白色塑料调色板)中,仔细观察样品的颜色、形状、质地。
6.3.2 有效活菌数的测定
采用平板计数法,根据所测微生物的种类选用适宜的培养基。
若采用大可能数(Most Probable Number,MPN)5管法,遵照附录C的规定。
6.3.2.1 系列稀释
称取样品10 g(精确到0.01 g),加入带玻璃珠的100 mL的无菌水中(液体菌剂取l0.0 mL加入90 mL的无菌水中),静置20 min,在旋转式摇床上200 r/min充分振荡30 min,即成母液菌悬液(基础液)。
用无菌移液管分别吸取5.0mL上述母液菌悬液加入45 mL无菌水中,按1:10进行系列稀释,分别得到1:1×101,1:1×102,1:1×103,1:1×104……稀释的菌悬液(每个稀释度应更换无菌移液管)。
6.3.2.2 加样及培养
每个样品取3个连续适宜的稀释度,用无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1 mL,加至预先制备好的固体培养基平板上,分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂于琼脂表面。
每一稀释度重复3次,同时以无菌水作空白对照,于适宜的条件下培养。
6.3.2.3 菌落识别
根据所检测菌种的技术资料,每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时,检测结果无效,应重做。
6.3.2.4 菌落计数
以出现20~300个菌落数的稀释度的平板为计数标准(丝状真菌为10~150个菌落数),分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度,其平均菌落数在20~300个之间时,则以该平均菌落数计算。若有两个稀释度,其平均菌落数均在20~300个之间时,应按两者菌落总数之比值决定。若其比值小于等于2应计算两者的平均数;若大于2则以稀释度小的菌落平均数计算。有效活菌数按式(1)或式(2)计算:
nm = kv1/(m0v2) ×10-8 …………………(1)
nv = kv1/(v0v2) ×10-8 …………………(2)
式中:
nm — 质量有效活菌数, 亿/g
nv — 体积有效活菌数, 亿/mL
— 菌落平均数, 个
k — 稀释倍数
v1 — 基础液体积, mL
v2 — 菌悬液加入量, mL
v0 — 样品量, mL
m0 — 样品量, g
6.3.3 霉菌杂菌数的测定
采用马丁培养基,测定方法同6.3.2。
6.3.4 杂菌率的测定
除样品有效菌外其它的菌均为杂菌。样品中杂菌率按式(3)计算:
m = n1/(n1+n)×100 …………………(3)
式中:
m — 样品杂菌率, %
?n1 — 杂菌数, 亿/g(mL)
n — 有效活菌数, 亿/g(mL)
6.3.5 水分的测定
将空铝盒置于干燥箱中105 ℃±2 ℃烘干 0.5 h,冷却后称量记录空铝盒的质量。然后称取2份平行样品(颗粒型样品,应先粉碎过1.0 mm试验筛),每份20 g(精确到0.01 g),分别加入铝盒中并记录质量。将装好样品的铝盒置于干燥箱中105 ℃±2 ℃下烘干4 h~6 h。取出置于干燥器中冷却20 min后进行称量。水分含量按式(4)计算(结果为两次测定的平均值):
w = (m1- m2)/( m1- m0) ×100 …………………(4)
式中:
w — 样品水分含量, %
m0 — 空铝盒的质量, g
m1 — 样品和铝盒的质量, g
m2 — 烘干后样品和铝盒的质量, g
6.3.6 细度的测定
6.3.6.1 粉剂样品
称取样品50 g(精确到0.1 g),放入300 mL烧杯中,加200 mL水浸泡10 min~30 min后倒入孔径0.18 mm的试验筛中,然后用水冲洗,并用刷子轻轻地刷筛面上的样品,直至筛下流出清水为止。将试验筛连同筛上样品放入干燥箱中,在105 ℃±2 ℃烘干4 h ~6 h。冷却后称量筛上样品质量。样品细度按式(5)计算:
s ={1- m1/[ m0(1-w)]} ×100 …………………(5)
式中:
s — 筛下样品质量分数, %
m0 — 样品质量, g
w — 样品含水量, %
m1 — 筛上干样品质量, g
6.3.6.2 颗粒样品
称取样品50 g(精确到0.1 g),将两个不同孔径的试验筛(1.0 mm和4.75 mm)摞在一起放在底盘上(大孔径试验筛放在上面)。样品倒入大孔径试验筛内筛样品,然后称小孔径试验筛上的样品质量。颗粒细度按式(6)计算:
g = m1 /m0 ×100 …………………(6)
式中:
g — 样品质量分数, %
m1 — 小孔径试验筛上样品质量,g
m0 — 样 品 质 量, g
6.3.7 pH值的测定
打开酸度计电源预热30 min,用标准溶液校准。
pH值的测定,每个样品重复三次,计算三次的平均值。
6.3.7.1 液体样品
用量筒取40mL样品放入50 mL的烧杯中,直接用酸度计测定,仪器读数稳定后记录。
6.3.7.2 粉剂样品
称取样品15 g,放入50 mL的烧杯中,按1:2(样品:无离子水)的比例将无离子水加到烧杯中(如果样品含水量低,可根据基质类型按1:3~1:5的比例加无离子水),搅拌均匀。然后静置30 min,测样品悬液的pH值,仪器读数稳定后记录。
6.3.7.3 颗粒样品
样品先研碎过1.0 mm试验筛,按照6.3.7.2的方法测定。
6.3.8 粪大肠菌群数的测定
应符合GB/T 19524.1《肥料中粪大肠菌群的测定》的规定。
6.3.9 蛔虫卵死亡率的测定
应符合GB/T 19524.2《肥料中蛔虫卵死亡率的测定》的规定。
6.3.10 纤维素酶活、蛋白酶活的测定
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