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一、 发酵前准备工作

（1） 检查电源是否正常，空压机、蒸汽发生器和循环水系统是否正常工作。

（2） 检查系统上的阀门、接头及紧固螺钉是否拧紧。

（3） 开动空压机，用0.15Mpa压力，检查发酵罐、过滤器、管路、阀门等密封性是否良好，有无泄漏。罐体夹套与罐内是否密封（换季时应重点检测），确保所有阀门处于关闭状态。

（4） 检查冷却水压、电压、气（汽）压能否正常供应。进水压维持在0.12Mpa，允许在0.15-0.2Mpa范围变动，不能超过0.2Mpa，温度应低于发酵温度10℃以上；电源AC220V±10%，零地分开，频率50Hz，罐体可靠接地；输入蒸汽压力应维持在0.4Mpa，进入系统后通过阀门控制压力为0.12-0.13MPa；空压机压力值0.7Mpa，空气进入压力应控制在0.25-0.30MP（空气初级过滤器的压力值）。

（5） 检查电机能否正常运转。电磁阀能否正常吸合。

二、 灭菌

1.      1. 发酵系统安装好后的初次清洗

罐内的清洗：种子罐可将罐体上方的法兰卸开，由操作工采用洁净布手动清洗，结束后排尽罐内的污水，在多冲洗几遍即可。发酵罐的清洗可采用自来水管通过手孔向罐体内壁冲洗，当水位上升到搅拌轴的第二片叶轮时停止冲洗，开动电机搅拌清洗。各管路的清洗，可以先采用清水冲洗，再根据相应功能采用相应的清洗介质（清洗管路时应以保护管路中的各种元件为前提），具体步骤可参考“空气管路的灭菌”。如果发酵系统长时间不用或培养的菌体与上一批次的不相同时，可采用2%NaOH清洗，清洗结束后应对发酵系统灭菌。

1.      2. 发酵罐空消

（1） 空气精过滤器的空消：将所有阀门均关闭，然后微开J3、J4、J5、打开Q9，通过调节J3、J4、J5阀门的开启度保持空气精过滤器上端压力表读数为0.12-0.125Mpa，维持30分钟，空气经过滤器消毒完成。

（2） 发酵罐空消：打开G2、J2、G3、J1、J9、Q6、Q7及Q9，通过调节G2和J1阀门的开启度调节发酵罐压力控制在0.12-0.125Mpa，温度121度-125度。维持30分钟，发酵罐空消结束。

（3） 当空消时间达到30分钟后，关闭J2、J3、J5，然后迅速打开Q2、Q3，通空气吹扫空气精过滤器，待J4阀门出口空气干燥后关闭J2、J3、J4、J5，保持空气精过滤器压力表读数为0.1Mpa。

 

1.      3. 发酵罐实消

实消是当罐内加入培养基后，用蒸汽对培养基进行灭菌的过程。

(1)空消结束后，将校正好的PH电极装好，尽快将配好的培养基从加料口加入罐内。

(2)培养基在进罐之前，应先糊化，一般培养基的配方量应根据工艺要求确定，发酵液的终容积为罐体全容积的70％左右计算(泡沫多的培养基为60％左右，泡沫少的培养基可达75～80％)，考虑到冷凝水和接种量因素，以及是否流加，初定容由生产根据工艺的要求自行决定，需在实践中摸索。

(3)开启机械搅拌装置，低速转动，使罐内物料均匀混合。

(4)打开夹套排污阀Q8、蒸汽阀J7，对罐内培养基预热（采用夹套通汽预加热）。当罐内温度升到90℃时（具体温度应按蒸汽质量而变动），关闭夹套进汽阀J7，关闭Q8，全打开进汽阀G2、J9,微开Q6、Q7，关闭Q4、Q5，向罐内通蒸汽，微开尾气阀门J1，关闭电机搅拌。

(5)通过调节G2和J1的开启度，当温度升到121—123℃，罐压升至0.12MPa时，控制蒸汽阀门G2、J1、J9的开度，维持温度与罐压，并开始计时，当时间到达30分钟之前，关闭G3（关闭前应人为地开大蒸汽量几次，避免培养基残留于阀门处）,关闭QJ9，关闭Q6、Q7，关闭Q9、G2停止供汽。关闭夹套排污阀门Q8，打开冷却水阀Q4、Q5向夹套通水冷却，打开电机搅拌，当压力降到0.05MPa时打开空气阀门Q3、Q2、G1向罐内通空气，加快冷却速度，并保持罐压为0.05MPa，直到罐内培养基温度降至接种温度。

三、 种子罐接种

接种：

(1)本系统采用火焰封口接种，接种前应事先准备：酒精棉花、钳子、镊子、接种环、石棉网手套。

(2)菌种装入三角烧瓶内，接种量根据工艺要求确定。

(3)将酒精棉花围在接种环周围点燃，将菌种瓶口在火焰上烧一会儿，拧开接种口，迅速将菌种倒入罐内，此时应向罐内通气，使接种口有空气排出（压力接近与零，但不能为零）。

(4)将接种口盖在火焰上灭菌后拧紧。接种后，罐压保持0.03MPa~0.07MPa，调节通风量。

四、 取样

在接种完成后或在发酵中途要取样检查时，可通过取样口取样。取样前，取样管路阀门需用蒸汽灭菌，防止杂菌污染而引起误导，取样结束后同样要用蒸汽冲洗取样管道及阀门。

操作方法：全开蒸汽阀门Q9和J9，微开Q7、Q6、G3，当时间到15分钟后，关闭Q6、Q7、J9、微开G3，打开Q6，先将取样管内的液体排光后，将准备好的取样瓶在火焰边打开，快速取样并盖好，关闭G3，然后打开J9、Q6、Q7清洗灭菌取样口5分钟，关闭Q6、Q7、J9。取样完成。

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